CAR-T клетки снижают амилоидную нагрузку в мышиной модели болезни Альцгеймера

При болезни Альцгеймера (БА) существует не так уж много вариантов лечения. В первую очередь это адуканумаб, леканемаб и донанемаб — антитела, которые убирают амилоидные бляшки, но их клиническая эффективность остается под сомнением. Необходимы новые варианты терапии.

Ранее было показано, что CD4+ T-клетки способствуют восстановлению когнитивных функций после повреждения центральной нервной системы. Международная группа ученых предположила, что антигенспецифичные CD4+ T-клетки могут помочь и при БА. Используя технологию CAR, они создали специфичные к амилоидным бляшкам рецепторы на поверхности CD4+ T-клеток.

Было необходимо минимизировать реакцию на мономеры и олигомеры, так что авторы исследования начали с доступных последовательностей терапевтических антиамилоидных антител адуканумаб и леканемаб. Вариабельные области тяжелой и легкой цепей этих антител соединили гибким линкером (G₄S)₃. Получившиеся scFv были слиты со спейсером-шарниром и трансмембранным регионом CD28 или CD8, после чего следовали костимулирующие домены CD28 или 4-1BB и ITAM-регион CD3ζ.

Конструкции поместили в клетки гибридомы, после чего стимулировали их мономерами, олигомерами или фибриллами пептида Aβ_1–42 человека. CAR на основе леканемаба с костимулирующим доменом CD28 (Lec28z) лучше работал в этом эксперименте, чем CAR на основе адуканумаба (Adu28z) или 4-1BB (Lec4-1BB), причем гибридома активировалась в ответ на фибриллы с минимальной реакцией на мономеры и олигомеры.

Далее исследователи стимулировали гибридомы Lec28z или Lec4-1BB экстрактом мозга мышей дикого типа или 5xFAD (модель БА). Более сильная и специфическая активация снова происходила с Lec28z, который и использовался в дальнейшем.

Авторы проверили, будет ли Lec28z активировать первичные мышиные CD4+ T-клетки. Клетки изолировали из селезенки мышей дикого типа и экспрессировали в них Lec28z или контрольный CAR. Полученные CAR-T клетки стимулировали фибриллами Aβ и проанализировали методом проточной цитометрии. После стимуляции экспрессия Lec28z CAR (но не контрольного CAR) на поверхности снизилась, что является нормальной реакцией на активацию. Одновременно повышалась экспрессия маркеров активации CD69 и CD25.

Lec28z CD4+ CAR-T клетки ввели мышам 5xFAD и через шесть недель увидели, что клетки накапливаются в богатых амилоидом участках. При этом уровень амилоидоза в твердой мозговой оболочке снижался. Эффекта на амилоидоз паренхимы выявлено не было.

Общее число T-клеток в мозге и оболочках повышалось, в основном за счет CD4+ T-клеток. Была также отмечены активация микроглии. Это может говорить о пролонгированной активации T-клеток и возникновении побочных эффектов.

Тогда исследователи трансфецировали первичные CD4+ T-клетки мРНК, кодирующей рецептор Lec28z; CAR-T клетки вводили мышам трижды в течение четырех недель, после чего анализировали состояние мозга. При таком режиме лечения число бляшек в паренхиме снижалось по сравнению с контролями. Активация микроглии была не такой выраженной, также снижался астроглиоз, характерный для поздних стадий амилоидоза.

Таким образом, клеточная иммунотерапия делает многие признаки БА менее выраженными. По словам авторов, созданная ими технологическая основа далека от немедленного терапевтического применения. Нужно дополнительное усовершенствование конструкции для достижения баланса между терапевтической активностью и безопасностью.

CAR-Т-клетки уменьшают фиброз печени у мышей