Тест на T-клеточный иммунитет не позволяет достоверно определить, болел ли человек COVID-19

Антитела против коронавируса исчезают через некоторое время после болезни. Ученые предполагают, что тесты на SARS-CoV-2-специфичные T-клетки помогут расширить временное окно для диагностики. Однако исследования клеточного иммунитета затруднены из-за перекрестных реакций на сезонные коронавирусы. Шведские ученые исследовали качество теста на Т-клеточный иммунный ответ, в основе которого лежит метод FluoroSpot. Использование разных наборов пептидов для стимуляции T-клеток позволило улучшить качество анализа. Но, по мнению авторов, чувствительность и специфичность теста все равно недостаточно высоки для его применения в клинике.

Credit:
cgtoolbox | 123rf.com

С начала пандемии было разработано множество серологических тестов для анализа выработки антител, в том числе нейтрализующих, к SARS-CoV-2 у переболевших и вакцинированных. Уровни нейтрализующих антител остаются стабильными на протяжении по крайней мере восьми месяцев. Тем не менее, более полную картину специфичности, стабильности и продолжительности иммунного ответа могло бы дать изучение клеточного иммунитета. Во многих исследованиях было показано, что у переболевших COVID-19 формируется стойкий ответ CD4+ Т-лимфоцитов (T-хелперов) и менее стойкий ответ CD8+ Т-киллеров.

Проблема изучения Т-клеточного иммунитета заключается в наличии неспецифических реакций Т-клеток, появившихся в ответ на сезонные коронавирусы (HCoV). Многие наборы для определения Т-клеточного иммунитета содержат пептиды с участками, перекрывающимися у разных коронавирусов. Ученые из Швеции оценили чувствительность и специфичность теста на T-клеточный иммунитет и возможность его использования в диагностических целях.

Образцы крови брали у шведских медработников в рамках исследования COMMUNITY (COVID-19 Biomarker and Immunity), посвященного изучению формирования длительного иммунитета после COVID-19 и вакцинации. Первые образцы крови были взяты в апреле-июне 2020 года и далее каждые четыре месяца. В работе использовали образцы 187 серопозитивных людей, переболевших COVID-19 в умеренной или легкой форме, у которых сформировались антитела как к S, так и к N-белку, и образцы 102 серонегативных людей. Также брали образцы у 55 пациентов, переболевших COVID-19 в тяжелой форме. Образцы для новой работы собирали в октябре 2020 года.

Для оценки формирования Т-клеточного ответа использовали FluoroSpot — метод, который позволяет детектировать в единичных клетках выработку нескольких аналитов с помощью антител. Для стимуляции Т-клеток использовали два коммерческие набора пептидов: P166, содержащий пептиды из домена S1 S-белка, и P47, содержащих пептиды из S-, N- и M-белков и белков, закодированных ORF-3a и ORF-7a. Также использовали специально разработанный SARS-CoV-2-специфичный набор пептидов P16, в котором участки пептидов перекрывались с гомологичными участками сезонных коронавирусов не более, чем на протяжении пяти аминокислот.

Для набора P47 специфичность теста составила 80,4%, для P166 — 85,3%, для P16 — 96,1%. Если коммерческие наборы применять вместе, специфичность была 91,3%. Таким образом, коммерческие наборы пептидов показали довольно низкую специфичность.

Тяжесть перенесенной болезни влияла на чувствительность теста. Набор P47 показал чувствительность 92,0% и 96,4%, P166 — 66,8% и 84,0%, P16 — 76,5% и 92,7%, оба коммерческие набора вместе — 66,3% и 84,5% для группы с легким и умеренным течением болезни и для пациентов с тяжелым течением COVID-19, соответственно.

Точность теста при использовании набора P47 составила 87,9%, P166 — 73,4%, P16 —83,4%, два коммерческих набора — 75,1%. Набор P166 давал много ложноположительных результатов и низкую чувствительность. При использовании P47 чувствительность была выше, но специфичность – ниже. Специфичность можно повысить, но за счет чувствительности. По своим параметрам тест на T-клетки не может приблизиться к серологическому. Авторы считают, что существующий тест на клеточный иммунитет не подходит для применения в клинике, но остается важным инструментом исследований.

Источник

Sara M. Mangsbo, et al. An evaluation of a FluoroSpot assay as a diagnostic tool to determine SARS-CoV-2 specific T cell responses // PLOS ONE September 30, 2021; DOI: 10.1371/journal.pone.0258041

Добавить в избранное

Вам будет интересно