Тезаурус

Рекомбиназная полимеразная амплификация (изотермическая рекомбиназная полимеразная амплификация, Recombinase Polymerase Amplification, RPA) — альтернатива полимеразной цепной реакции, протекающая при постоянной температуре. Методика RPA разработана биотехнологической компанией TwistDX LTD (Кембридж, Великобритания.)

Технология RPA обеспечивает умножение генетического материала с единичных молекул до детектируемого уровня менее чем за 10 минут, а сама реакция осуществляется в изотермических условиях, т.е. нет необходимости в циклическом изменении температуры. Для этого используются ферменты рекомбиназы, которые образуют комплексы с праймерами и затем спаривают их с гомологичными последовательностями в двухцепочечной ДНК. С однонитевой ДНК в это время взаимодействует белок SSB (single-stranded DNA binding), стабилизируя образовавшуюся структуру. Амплификацию ДНК осуществляет фермент ДНК-полимераза, далее все происходит как в традиционной ПЦР.

При добавлении обратной транскриптазы к реакционной смеси посредством RPA возможно определять РНК, так же как и ДНК, при этом не требуется отдельная процедура получения кДНК. Поскольку реакция изотермическая, для неё можно использовать более дешевое и простое оборудование. Оптимальный диапазон температур 37—42 °С, но реакция идет с небольшой скоростью и при комнатной температуре. Подобное преимущество делает RPA превосходным кандидатом для разработки недорогих, быстрых, «полевых» молекулярных диагностических тестов.