Генная терапия гемофилии A не вызвала повреждений печени у участников

Гемофилия A развивается из-за нарушения активности фактора VIII (FVIII). Находится в разработке генная терапия этого заболевания препаратом валоктокоген роксапарвовек (AAV5-hFVIII-SQ), представляющим собой человеческий ген F8 без B-домена (hFVIII-SQ) с гибридным промотором для экспрессии в печени, запакованный в аденоассоциированный вирусный вектор. Тринадцать взрослых мужчин с гемофилией A получили AAV5-hFVIII-SQ. В результате уровень экспрессии FVIII достиг клинически релевантных значений, а кровотечение снизилось. Эффект длился в течение пяти и четырех лет соответственно. Однако биологический механизм экспрессии трансгена известен не до конца. В частности, неясно, почему у разных людей трансген экспрессируется на различных уровнях. Исследователи из BioMarin Pharmaceutical и коллабораторы решили прояснить эти вопросы.

Авторы провели биопсию печени пяти участников клинических испытаний. С момента участия в КИ прошло 2,6–4,1 года. Сначала исследовали гистопатологию печени. Не было выявлено воспаления, фиброза, апоптоза, некроза или признаков хронических заболеваний печени. У четырех из пяти участников был выявлен умеренный стеатоз.

Распределение ДНК hFVIII-SQ в тканях печени выявили с помощью гибридизации in situ. Чем выше была первоначальная дозировка, тем большая доля гепатоцитов имела копии векторного генома. Интересно, что у двух людей, получивших одинаковую дозу препарата, было положительно окрашено схожее количество гепатоцитов, при этом уровни активности циркулирующего FVIII различались более, чем в десять раз. Также авторы выявили в клетках полноразмерные кольцевые hFVIII-SQ векторные геномы в виде мономеров и конкатемеров.

РНК hFVIII-SQ показали у всех участников. В среднем более высокая доза препарата коррелировала с повышенным уровнем экспрессии, кроме вышеупомянутого случая — уровень РНК у одного из участников был в десять раз ниже, чем у другого участника, получившего ту же дозу препарата. При этом эффективность трансдукции, по-видимому, была одинаковая. Для объяснения этого явления авторы провели РНК-секвенирование, однако однозначного ответа не получили. Они предположили, что причина — в ацетилировании транскрипционных факторов, которые связываются с промотором AAV5-hFVIII-SQ.

Измерить уровень белка FVIII в образце напрямую не удалось. Вероятно, причина в том, что перед биопсией участники получали рекомбинантный hFVIII, чтобы предотвратить кровотечение. Однако не было выявлено признаков стресса эндоплазматического ретикулума, связанного с экспрессией трансгена.

Авторы предполагают, что долговременную экспрессию FVIII в печени обеспечивает формирование кольцевых эписом после трансдукции. Впрочем, они не исключают возможности интеграции трансгена в геном. Неожиданно, активность FVIII в плазме обратно коррелировала с уровнем его РНК у трех участников. Причина может быть в неэффективной трансляции, фолдинге, посттрансляционной модификации и (или) секреции белка. Авторы говорят о необходимости более масштабных испытаний.