Латентный герпесвирус 6 может активироваться в CAR T-клетках

CAR T-терапия зарекомендовала себя как эффективный метод лечения онкологических и других заболеваний. Однако сниженный иммунный ответ у онкопациентов повышает риск инфекций и реактивации латентных вирусов (герпесвирусов, полиомавирусов, аденовирусов, парвовирусов и др.). Предыдущие исследования показали, что у пациентов, получивших CAR T-терапию, может развиться инфекция вирусом герпеса 6 типа (HHV-6), описаны в том числе случаи энцефалита. Авторы статьи, опубликованной в Nature, с помощью высокопроизводительных методов показали, что HHV-6 действительно выявляется как в культивируемых клетках, экспрессирующих CAR, так и у пациентов.

Латентная инфекция HHV-6 у человека обычно возникает после первичной инфекции в первые два года жизни; примерно у 1% населения имеется хромосомно-интегрированный HHV-6, который может передаваться потомству. Первичные инфекции в младенчестве чаще всего протекают без осложнений, однако реактивация у взрослого может вызвать тяжелое заболевание, для лиц с ослабленным иммунитетом потенциально смертельное. В мире распространены две линии HHV-6; более нейровирулентный HHV-6A чаще встречается в странах Африки к югу от Сахары, а HHV-6B преобладает в США, Европе и Японии. Примечательно, что белок OX40, рецептор HHV-6B (он же CD134), сильнее экспрессируется во время активации CD4⁺ Т-клеток и в меньшей степени — во время активации CD8⁺ Т-клеток.

Ученые начали работу с высокопроизводительного скрининга баз данных на предмет выявления вирусов, реактивирующихся в клетках человека. Обнаружилось, что HHV-6 дает наиболее выраженный позитивный сигнал в первичных T-клетках, и в целом в T-клетках HHV-6 встречался чаще других латентных вирусов. Детальный анализ данных секвенирования подтвердил, что HHV-6В способен реактивироваться в T-клетках in vitro и in vivo, и культивируемые CAR T-клетки не стали исключением.

Реактивацию HHV-6 в различных типах клеток авторы исследовали у пациентов с энцефалитом, вызванным HHV-6, которые получали CAR T- терапию. За активацией HHV-6 во время приготовления препарата CAR T следили по появлению вирусной ДНК, которую обнаруживали с помощью ПЦР в реальном времени. В течение 19 дней культивирования вирус активировался. Дальнейшие исследования показали, что существуют T-клетки — «суперэкспрессоры» HHV-6, причем все они относились к числу CD4+ T-клеток. Активация вируса сопровождается изменениями в экспрессии клетки-хозяина, а именно повышением экспрессии цитокина лимфотоксина α и понижением экспрессии лимфотоксина β. Также изменилась экспрессия ряда генов, связанных с ответом на вирусную инфекцию.

Чтобы показать, что процедура создания CAR T-препарата не активирует HHV-6, ученые взяли клетки донора, у которого HHV-6 встроился в геном, и проследили за количеством соответствующей РНК на протяжении 19 дней. Они проверили как стандартный протокол производства CAR T-клеток, так и модифицированный, но число копий вирусной РНК не увеличивалось. Авторы сделали вывод, что ни один этап протокола сам по себе не может запустить реактивацию HHV-6, даже если копии его генома присутствуют в каждой клетке. Видимо, активация является стохастическим событием, вызванным пока не установленными особенностями культивирования и/или состояния клеток-хозяев.

Исследование пациентов, получивших CAR-T и страдающих от инфекции HHV-6, показало, что в норме в мононуклеарных клетках периферической крови HHV-6 транскрипционно не активен. Активация может происходить как во время приготовления препарата, in vitro, так в организме пациента, то есть in vivo. Фоскарнет, применяющийся при лечении герпесвирусных инфекций, успешно подавляет реактивацию HHV-6 как в организме пациента, так и в культуре клеток.

Хотя в настоящее время используются преимущественно аутологичные (полученные из клеток самого пациента) препараты для CAR T-терапии, разрабатываются и гипоиммунногенные аллогенные продукты. Как оказалось, в аллогенных CAR T-клетках тоже происходит реактивация HHV-6. Авторы работы подчеркивают важность проверки различных продуктов для клеточной терапии на активацию HHV-6 и других вирусов.

Редактирование эпитопов защитит от CAR-T-клеток здоровые клетки и сами CAR-T-клетки