Маленькие антитела ингибируют размножение эрлихий в мышиной модели инфекции

Внутриклеточный паразит Ehrlichia chaffeensis, возбудитель эрлихиоза, блокирует апоптоз клетки с помощью белка Etf-1. Ученые разработали нанотела, которые проникают внутрь инфицированной клетки и связывают Etf-1. Эффективность нанотел проверили in vitro и на мышах.

Клещ Amblyomma americanum, один из переносчиков эрлихий.

Credit:  Steven Heap | 123rf.com

Группа ученых из США создала препарат против моноцитарного эрлихиоза человека на основе антител ламы и протестировала его на мышах.

Моноцитарный эрлихиоз человека — это опасная клещевая инфекция, которую вызывает бактерия Ehrlichia chaffeensis, облигатный внутриклеточный паразит, поражающий моноциты. По проявлениям эрлихиоз похож на тяжелый грипп и сопровождается гематологическими нарушениями и гепатитом. В настоящее время от эрлихиоза нет вакцин, а единственный эффективный антибиотик, доксициклин, противопоказан беременным и детям.

E. chaffeensis секретирует в цитоплазму клетки-хозяина белок Etf-1 (Ehrlichia translocated factor-1), который локализуется в митохондриях и блокирует опосредуемый ими апоптоз. Это позволяет бактерии успешно развиваться внутри клетки без риска погибнуть вместе с ней. Авторы новой работы сделали Etf-1 мишенью для так называемых нанотел — вариабельных доменов одноцепочечных антител, синтезируемых верблюдовыми. Нанотела имеют преимущество перед «большими» человеческими антителами, так как могут проникать внутрь клетки и связываться с внутриклеточными антигенами.

Ученые иммунизировали ламу растворимым полноразмерным рекомбинантным Etf-1, выделили РНК из лейкоцитов периферической крови и на ее основе создали библиотеку нанотел. Из этой библиотеки выбрали 24 нанотела, клонировали каждое на вектор и трансфицировали этими векторами клетки макаки-резуса, экспрессирующие Etf-1. Самым удачным оказалось нанотело D7. Оно связывалось с Etf-1 и блокировало его перемещение в митохондрию.

Чтобы нанотело работало in vivo, ученые конъюгировали его с циклическим пептидом CPP12. Этот пептид связывается с фосфолипидной мембраной клетки и попадает внутрь за счет эндоцитоза, а потому может выступать в роли носителя терапевтических молекул, в данном случае — D7. Иммунодефицитным мышам вводили внутрибрюшинно макрофаги, зараженные E. chaffeensis, и через 12 часов — CPP-D7. Через две недели пролиферация E. chaffeensis в организме мышей, получивших CPP-D7, была значительно ниже, чем у контрольных мышей, получивших неэффективное нанотело или фосфатный буфер. Это говорит об ингибирующем воздействии нанотела на E. chaffeensis и согласуется с результатами экспериментов in vitro.

По мнению авторов, в перспективе нанотела могут дополнить или заменить антибиотики широкого спектра в терапии внутриклеточных инфекций.

Источник

Wenqing Zhang, et al. // An intracellular nanobody targeting T4SS effector inhibits Ehrlichia infection. // PNAS May 4, 2021 118 (18) e2024102118; DOI: 10.1073/pnas.2024102118

Добавить в избранное

Вам будет интересно