Обнаружить коронавирус в гистологических образцах можно с помощью доступных реагентов

Ученые из США определили, какие коммерчески доступные реагенты можно использовать для обнаружения SARS-CoV-2 в клетках, зафиксированных формалином и залитых парафином. Эти реагенты позволяют проводить иммуногистохимический и иммунофлуоресцентный анализы (ИГА и ИФА), а также in situ гибридизацию.

Credit:
Shutterstock.com

Исследование зараженных вирусом тканей, взятых у людей или животных, — неотъемлемая часть изучения болезни. Стандартная подготовка тканей включает фиксацию формалином и заключение в парафин. Вирусные антигены обычно детектируют с помощью антител стандартными методами ИГА и ИФА, вирусные нуклеиновые кислоты — с помощью in situ гибридизации. Эти методы применялись и для обнаружения SARS-CoV-2, ученые использовали реагенты собственного производства.

Авторы нового исследования, доступного на bioRxiv, протестировали коммерчески доступные реагенты. Они инкубировали клетки почечного эпителия зеленой мартышки Vero 76 с SARS-CoV-2, затем фиксировали формалином и заливали парафином по обычной схеме.

Ученые искали антитела для обнаружения коронавируса среди антител к консервативным вирусным эпитопам. Из шести проверенных вариантов только два оказались эффективны: кроличьи поликлональные антитела против S-белка и мышиные моноклональные антитела против нуклеокапсидного белка производства Sino Biological. Оба варианта подходили как для ИГА, так и для ИФА.

Стандартная in situ гибридизация также оказалась эффективна для обнаружения коронавирусной РНК. Коммерчески доступные зонды RNAscope на РНК положительной и отрицательной полярности однозначно выявляли РНК SARS-CoV-2. При этом оказалось, что РНК положительной полярности распределены по всей цитоплазме, в то время как минус-цепи локализованы в перинуклеарных тельцах включения. Мультиплексная гибридизация in situ дала те же результаты. Список зондов авторы приводят в таблице.

Помимо этого, ученые показали возможность двойного окрашивания — на вирусные белки и РНК — одного и того же образца. Для этого использовались кроличьи поликлональные антитела к S-белку коронавируса и зонды к плюс-цепи РНК.

Исследование тканей необходимо не только для изучения хода COVID-19, но и для поиска модельного организма. Коронавирусная инфекция у идеального модельного животного должна протекать так же, как у человека. Анализ разнообразных тканей помогает оценить степень сходства.

Источник

Xiankun Zeng, et al. // Molecular Detection of SARS-CoV-2 in Formalin Fixed Paraffin Embedded Specimens. // bioRxiv April 22, 2020; DOI: 10.1101/2020.04.21.042911
Добавить в избранное

Вам будет интересно