ПЦР — не просто Taq. Мастер-микс уже в деле
Проект заканчивается, а ПЦР остается — ура всем участникам! Вы отвечали на вопросы о нашем любимом методе — ПЦР — и получали образцы от Thermo Fisher Scientific. Теперь настало время вам снова высказать свое веское мнение.
На данный момент практически все участники опроса получили свои образцы мастер-микса PowerTrack SYBR Green Master Mix от Thermo Fisher Scientific, а некоторые уже пустили их в работу. Мы были просто счастливы получить первые отзывы и спешим поделиться ими с вами! Честные отзывы лучше любой рекламы. Прочитайте мнения коллег и принимайте решение сами.
Вот что пишет Корнеев К. из Института молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН:
PowerTrack SYBR Green работает сопоставимо с другими стандартными мастер-миксами (наша лаборатория, например, чаще всего работает с qPCRmix-HS SYBR от Еврогена). Достоверного улучшения/ухудшения качества ПЦР на приборах BioRad CFX96 и AB7500 мы не заметили. Цветовая кодировка реагентов помогает работать в первую очередь менее опытным сотрудникам (в т.ч. удобно использовать при проведении практикумов у студентов), однако для опытных постановщиков ПЦР это не является критически важной опцией. Вызывает вопросы существенная разница в стоимости между тем же qPCRmix-HS SYBR от Еврогена и PowerTrack SYBR Green от Thermo — полный переход лаборатории на новый мастер-микс представляется экономически нецелесообразным, однако мы с большой вероятностью будем использовать PowerTrack SYBR Green при обучении методу ПЦР в реальном времени.
Ученый — всегда ученый, даже если пишет обзор на продукт. Читаем вместе небольшую научную работу от заведующего лабораторией биохимии вирусных инфекций, ведущего научного сотрудника ИМБ РАН Иванова А.В.
Название: Отзыв на смесь для проведения ПЦР в реальном времени
Объект: выделенная из клеток гепатокарциномы человека Huh7.5 тотальная РНК (набором High Pure RNA Isolation Kit от Roche), обратная транскрипция проведена при помощи обратной транскриптазы RevertAid (Thermo) и гексамерного праймера случайной последовательности.
Для ПЦР в реальном времени использовали кДНК, эквивалентную 20 нг тотальной РНК и ее серийные разведения в пять раз. Измеряли уровни транскриптов геном EpCAM и GUSB.
Смесь сравнения: Готовая смесь для ПЦР qPCRmix-HS SYBR от Еврогена.
Результаты:
1. Обе смеси показывают сходную высокую сходимость результатов и позволяют эффективно амплифицировать целевые фрагменты ДНК
2. В случае смеси от Thermo продукты накапливались в среднем на один цикл позже, чем в случае смеси от Еврогена. Иллюстрировано на рисунке ниже (малиновым отмечены кривые для смеси от Еврогена, красным – смеси от Thermo)
Выводы: смесь от Thermo может быть использована в лаборатории в экспериментах с ПЦР в реальном времени. Наша лаборатория будет делать выбор, исходя из сопоставления цены на смеси этих двух производителей.
Вот бы все обзоры в интернете были основаны на строгом научном методе!
Иногда картинка стоит тысячи слов. Спасибо Дубилей С. из Института биологии гена РАН за эту фотографию рабочего процесса.
Мы все еще принимаем отзывы. Напишите свое мнение о мастер-миксе на нашу редакционную почту pcreditor@yandex.ru и получите скидку 10% в интернет-магазине PCR.SHOP — в ответ на ваше письмо мы вышлем промокод.