Российский ПЦР-тест выявляет холерный и парагемолитический вибрионы с чувствительностью 100%

Дифференциальная диагностика инфекций, вызванных холерным (Vibrio cholerae) и парагемолитическим (V. рarahaemolyticus) вибрионами, актуальна для России в связи с сохраняющейся угрозой завоза возбудителя с эндемичных территорий южных стран, а также присутствием нехолерных и/или нетоксигенных вибрионов в окружающей среде средних географических широт.

V. cholerae — этиологический агент холеры, которая относится к особо опасным инфекционным заболеваниям и требует постоянного противоэпидемического мониторинга. Нетоксигенные штаммы холерных вибрионов могут вызывать спорадические случаи кишечных инфекций, не склонных к эпидемическому осложнению. Еще один представитель рода Vibrio, V. рarahaemolyticus, может быть причиной токсикопищевых инфекций, септицемий и других воспалительных процессов, чаще всего связанных с пребыванием в морской воде или с употреблением в пищу морепродуктов, в частности, устриц. В России парагемолитический вибрион встречается в водах Азовского и Черного морей, а также в Приморье.

До недавнего времени в стране для диагностики вибриозов, вызванных парагемолитическими вибрионами, использовались классические бактериологические методы. При этом быстрые и точные ПЦР тест-системы отечественного производства для идентификации V. cholerae в клиническом материале и объектах окружающей среды доступны для лабораторий более 10 лет.

Ученые из Ростовского-на-Дону противочумного института разработали набор для молекулярно-генетической диагностики «Vibrio-скрин-FL», с помощью которого можно различить инфекции V. cholerae и V. рarahaemolyticus. В наборе используются зонды к родоспецифическим и видоспецифическим генам: для рода Vibrio это достаточно консервативный ген SeqY, для вида V. cholerae — hlyA, для V. рarahaemolyticus — vppC. Обнаружение возбудителя происходит с помощью мультилокусной аллель-специфической ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией. ДНК для анализа выделяется из чистых культур, полученных бактериологическим методом.

В ходе испытаний набора использовали несколько видов рода Vibrio: по 15 штаммов V. cholerae и V. рarahaemolyticus (выделены из клинического материала и объектов окружающей среды), по четыре штамма V. fluvialis и V.vulnificus, а также по одному штамму гетерологичных микроорганизмов родов Salmonella, Escherichia, Proteus, Aeromonas, Pseudomonas, Helicobacter, Streptococcus, Staphylococcus, Enterococcus, Candida, взятых из коллекции Ростовского-на-Дону противочумного института.

Аналитическая чувствительность набора для всех трех генов составила 10⁶ копий гена, что соответствует чувствительности аналогичных тест-систем зарубежного производства. В состав российского наборе входят по одному видоспецифическому зонду в отличие от двух-трех в импортных аналогах. Преимущество новой тест-системы — возможность в одной пробе дифференцировать холерный вибрион от парагемолитического. Это существенно ускоряет время получения лабораторного ответа и дает возможность раньше начать противоэпидемические мероприятия. Зонд к родоспецифическому гену позволяет ускорить ответ о принадлежности культуры к другим видам вибрионов.

Высокая специфичность тест-системы «Vibrio-скрин-FL» подтверждена отсутствием перекрестного ответа с ДНК микроорганизмов других родов. Диагностическая чувствительность, проверенная на 20 штаммах V. cholerae и V. рarahaemolyticus, составила 100%.

Разработанный диагностический набор зарегистрирован (РУ РЗН 2021/13360) и рекомендован для практического профессионального применения в лабораториях, участвующих в санитарно-контрольных мероприятиях в рамках надзора за холерой.