Тест обнаруживает десятки клеток малярийного плазмодия в миллилитре крови

Анализ для выявления малых количеств малярийного плазмодия на основе изотермической рекомбиназной полимеразной амплификации с обратной транскрипцией показал приемлемую эффективность по сравнению с количественной ПЦР. Он может применяться там, где она недоступна.

Изображение:

Жизненный цикл малярийного плазмодия.

Credit: N.Vinoth Narasingam | Shutterstock.com

Основными инструментами диагностики малярии остаются микроскопия и экспресс-тесты (rapid diagnostic tests, RDT). Но они зачастую не обнаруживают паразитемию низкой плотности — малое количество паразитов в крови. Между тем такое состояние важно выявить для предотвращения дальнейшей передачи инфекции. Проведение полимеразной цепной реакции требует оборудования, которое не всегда имеется в лабораториях развивающихся стран.

Для идентификации малых количеств малярийного плазмодия разработан анализ на основе изотермической рекомбиназной полимеразной амплификации с обратной транскрипцией и иммунохроматографическим анализом (RT-RPA). Паразитемию низкой плотности удобно выявлять с помощью методов, нацеленных на высококопийные гены или на рибосомную 18S РНК паразита: транскриптов в клетке тысячи, и это повышает чувствительность.

Авторы работы, опубликованной в Journal of Clinical Microbiology, сравнили этот метод и ультрачувствительную количественную ПЦР с обратной транскрипцией (RT-qPCR). Для сравнения использовали экстракты нуклеиновых кислот из крови (114 образца), полученные после стандартизированной контролируемой инфекции человека (CHMI) спорозоитами Plasmodium falciparum — инфекцию, возникшую в результате этой процедуры, прекращают своевременным назначением противомалярийного препарата. В предварительных исследованиях также участвовали 28 человек без симптомов малярии в эндемичном по малярии районе (Ламбарене, Габон); в этом эксперименте оценивали эффективность RT-RPA для необработанных образцов крови (dbRT-RPA).

В 114 пробах крови положительное процентное согласие (PPA) с RT-qPCR составило 90% (95% ДИ: 80-96), отрицательное процентное согласие (NPA) — 100% (95% ДИ: 92-100). Нижний предел обнаружения — 64 паразита на миллилитр. В Габоне RT-RPA продемонстрировал 100%-ную точность с бессимптомными добровольцами, упрощеннная версия dbRT-RPA на необработанных образцах крови показала точность 89%. RT-RPA показал себя намного лучше петлевой изотермической амплификации (LAMP), удобной в полевых условиях: он обнаружил девять из десяти положительных образцов, выявленных с помощью RT-qPCR, в то время как LAMP — только 2 из 10.

Авторы делают вывод, что RT-RPA — надежный диагностический тест для выявления бессимптомных инфекций с низкой плотностью патогенов и может быть особенно полезен в тех условиях, где сложно применять ультрачувствительную ПЦР.

Источник

Albert Lalremruata, et al. // Recombinase polymerase amplification and lateral flow assay for ultrasensitive detection of low-density Plasmodi um falciparum infection from controlled human malaria infection studies and naturally acquired infections. // Journal of Clinical Microbiology, 2020; DOI:  10.1128/JCM.01879-19

Добавить в избранное

Вам будет интересно