Система праймированного редактирования генома работает аккуратнее, чем традиционный CRISPR

Команда Дэвида Лю из Института Эли и Эдит Бродов в коллаборации с учеными из других научных центров США сравнили версию PE2 разработанной ими системы точного редактирования генома (prime editing, праймированное редактирование) с CRISPR-опосредованной гомологичной рекомбинацией (HDR) на мышах. PE2 — это двухкомпонентная платформа, состоящая из никазы Cas9, сшитой с обратной транскриптазой вируса мышиной лейкемии, и гидовой РНК, которая одновременно выполняет роль матрицы, кодирующей необходимые изменения для целевого сайта. В качестве мишени был выбран сайт связывания транскрипционных факторов CArG box в промоторе гена Tspan2. Ученые вносили в CArG box три нуклеотидные замены с помощью HDR и одну — с помощью PE2. Количественная ОТ-ПЦР и иммунофлуоресцентная гибридизация РНК in situ подтвердили сходную эффективность HDR и PE2: мРНК Tspan2 отсутствовала в клетках гладких мышц сосудов. По результатам секвенирования, PE2, в отличие от HDR, не давала инделов в сайте-мишени и не приводила к нецелевым мутациям. Авторы заключают, что PE2 — достаточно точный инструмент для моделирования и корректирования однонуклеотидных вариаций у мышей. Работа опубликована в Genome Biology.

Добавить в избранное

Вам будет интересно