Для определения антител к SARS-CoV-2 используют вирусные белки со светящейся меткой

Оценка количества антител в плазме крови дополняет РНК-тесты и улучшает понимание течения заболевания. Уже предложены тесты, выявляющие антитела к белку нуклеокапсида вируса и/или к S-белку, на основе иммуноферментного анализа (ИФА), иммунофлуоресценции, иммунохроматографического анализа (ИХА; один из первых описан еще в феврале). Однако коммерческие ИФА-тесты на IgG способны детектировать инфекцию лишь через продолжительное время после появления симптомов (медианное время 14 дней). Поэтому актуально создание новых более чувствительных и специфичных систем для количественного и качественного определения антител в плазме пациентов на ранних стадиях заболевания.

В препринте статьи, опубликованном на medRxiv, авторы описывают принципиально иной метод детекции — систему иммунопреципитации люциферазы (LIPS, Luciferase Immunoprecipitation Systems). В отличие от ИФА, в LIPS антигены не сорбируют на подложке, а находятся в растворе и поэтому остаются в нативной конформации, что повышает чувствительность метода (для теста необходимо менее 5 мкл сыворотки крови). Для этого теста получают антиген с пришитым к нему светящимся белком люциферазой. Такой антиген инкубируют с антителами, потом добавляют шарики, связывающие антитела, промывают плашку и детектируют свечение. LIPS уже показал свою эффективность для определения антител против нуклеокапсида MERS-CoV и S-белка коронавируса, вызывающего синдром острой диареи свиней (SADS-CoV).

В новой работе американские ученые измеряли концентрации антител у пациентов с COVID-19 из четырех разных регионов США против рекомбинантных белков S и нуклеокапсида, экспрессированных в клетках млекопитающих. Всего использовали образцы от 35 пациентов с COVID-19, подтвержденным с помощью ПЦР-теста, 10 людей с симптомами COVID-19, которые не прошли ПЦР-тестирование, и 32 доноров, сдавших кровь до 2018 года, в качестве контроля.

Эксперименты с контрольными, заведомо отрицательными образцами показали низкий фон для антител к S-белку, но более высокий для антител к нуклеокапсиду. Поскольку для серологического теста важна высокая специфичность (отсутствие ложноположительных результатов), авторы установили высокие предельные значения для положительного сигнала.

Чувствительность теста для COVID-19 положительных проб, взятых более чем через 14 дней после появления симптомов, оказалась 100% в случае детекции антител против белка нуклеокапсида и 91% (32 из 35 проб) для S-белка. Однако чувствительность была значительно ниже для проб тех же пациентов, взятых в первые 14 дней болезни: 51% и 43%, соответственно, для белка нуклеокапсида и S-белка. Специфичность в обоих случаях составила 100%. Авторы отметили, что у людей с ослабленным иммунитетом антитела на оба белка появлялись в детектируемых количествах позже.

Для 9 из 10 человек с подозрением на COVID-19 были получены негативные результаты по обоим белкам, для одного положительные (и этот участник сообщал о контакте с SARS-CoV-2-положительным по ПЦР-тесту).

Также было показано, что тепловая инактивация плазмы крови в течение 30 мин при 56°С не влияет значимо на результаты тестов. Это важно для безопасной работы с образцами больных.