Аллогенные γδT-клетки уничтожают опухоли, не повреждая нормальные клетки крови

Терапия CAR T-клетками перспективна для лечения таких онкозаболеваний, как лейкозы. Однако при солидных опухолях она зачастую менее эффективна, а стоимость и длительность производства дополнительно ограничивают применение CAR T-клеток. Группа исследователей из Университета Кобе (Япония) предложила использовать аллогенные, то есть полученные не от самого пациента, γδT-клетки, чтобы создать готовые к применению клеточные препараты для иммунотерапии рака — это быстрее и дешевле, чем производство CAR-T из аутологичных клеток.  

γδT-клетки составляют примерно 3–5% лимфоцитов периферической крови. Они способны распознавать и уничтожать раковые клетки независимо от презентации антигена, то есть их активность не ограничена главным комплексом гистосовместимости (MHC). Ранее авторы работы получили индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (ИПСК) из линии γδT-клеток, а теперь использовали их для массового производства γδT-лимфоцитов. 

Сперва ученые подтвердили, что полученные из γδT-клеток и размноженные ИПСК могут повторно дифференцироваться в γδT-лимфоциты в отсутствие фидерных клеток и сыворотки. Протокол дифференцировки включал несколько этапов (подробности — на схеме ниже), и в общей сложности ИПСК размножились в 80 тысяч раз. На 39-й день авторы анализировали полученные клетки методом проточной цитометрии. Доля клеток, несущих на поверхности CD3, составила около 70%, но и у остальных сохранялись признаки Т-клеток — 99% содержали этот маркер в цитоплазме, а более 90% экспрессировали CD7. Кроме того, 98,9% дифференцированных клеток экспрессировали γδ Т-клеточный рецептор (γδ TCR). 

Credit:
Stem Cell Reports, 2026; DOI: 10.1016/j.stemcr.2026.103018 | CC BY-NC-ND

Большинство полученных γδT-клеток обладали эффекторным фенотипом, то есть экспрессировали CD45RA и были лишены CD27, а также вырабатывали интерферон-γ (IFN-γ), перфорин и гранзим B в ответ на стимуляцию клетками-мишенями. 

Цитотоксичность индуцированных γδT-клеток авторы оценили на клеточной модели, в которой мишенями служили линии Jurkat (иммортализованные Т-лимфоциты человека) и SW480 (клетки колоректального рака). Жизнеспособность клеток-мишеней оценивали по флуоресцентной или биолюминесцентной метке. За пять дней в кокультуре γδT-клетки уничтожили 97% Jurkat при соотношении эффектора к мишени 4:1, 90% — при соотношении 2:1. Аналогичные показатели в опыте с SW480 составили 93,7% и 77,7% при соотношениях 2:1 и 1:1. При этом в обоих случаях MHC клеток-мишеней и эффекторов не соответствовали друг другу. 

Что интересно, цитотоксичность индуцированных γδT-клеток была значимо выше, чем γδT-клеток, выделенных непосредственно из периферической крови. Однако они не атаковали периферические мононуклеары здорового донора (доля мертвых клеток-мишеней в таком опыте составила 8,5%). 

Затем цитотоксическую активность индуцированных γδT-клеток протестировали in vivo. Иммунодефицитным мышам подкожно вводили γδT-клетки и меченые Jurkat в соотношении 2:1, после чего в течение пяти недель отслеживали опухолевую нагрузку по биолюминесценции. γδT-клетки подавляли рост раковых — интенсивность биолюминесценции была ниже, чем в группе без лечения, и сами опухоли уменьшились в размере.

Аналогичный эксперимент провели с индуцированными γδT-клетками и SW480, вводя их под кожу трем мышам в соотношении 5:1. В контрольную группу включили трех мышей, которые не получали лечения после введения раковых клеток. Через четыре недели лечения интенсивность биолюминесценции была минимум на 76% ниже, чем в контроле; также значительно (на 80% и более) сократилась масса опухолей. 

Наконец, авторы протестировали γδT-клетки на органоидах колоректального рака, полученных от пациентов, — это более приближенная к реальности модель, чем отдельные клеточные линии. Подтвердив способность γδT-клеток атаковать органоиды in vitro, ученые ввели их под кожу иммунодефицитным мышам (соотношение эффекторных клеток к клеткам органоидов составило 10:1). Через шесть недель лечения интенсивность биолюминесценции опухоли была на 100%, 95% и 94% ниже, чем в контроле. 

Таким образом, γδT-клетки, полученные из ИПСК, цитотоксичны в отношении клеточной линии колоректального рака и органоидов, полученных от пациентов. Они также сдерживали рост опухолей у мышей, хотя здесь стоит отметить и ограничение — малый размер выборок. При этом аллогенные γδT-клетки не атаковали клетки периферической крови здорового донора. Полученные данные подчеркивают их потенциал для иммунотерапии колоректального рака. 

Атаку CAR T-клеток друг на друга предотвратили с помощью редактирования оснований CRISPR-системой