Конкурентный ИФА определяет антитела, блокирующие взаимодействие коронавируса с рецептором

Канадские ученые разработали конкурентный ИФА-тест, который выявляет антитела, блокирующие связывание S-белка коронавируса с клеточным рецептором ACE2. Новый метод может использоваться как дополнение к стандартным методам обнаружения нейтрализующих антител и в сероэпидемиологических исследованиях. Описание метода в виде препринта размещено на bioRxiv.

Credit:
Jarun Ontakrai | 123rf.com

С помощью ИФА можно определить наличие в крови поликлональных антител к SARS-CoV-2, выявление же именно нейтрализующих антител проводится с использованием культур клеток, вирусов или псевдовирусов, что сопряжено с определенными трудностями. Канадские ученые модифицировали ИФА таким образом, чтобы с его помощью стало возможно детектировать в сыворотке и плазме крови антитела, блокирующие взаимодействие рецептор-связывающего домена (RBD) SARS-CoV-2 с клеточным ACE2.

В стандартном ИФА антитела, связавшиеся с иммобилизованным антигеном, определяют с помощью добавления к ним антител, конъюгированных с ферментом — чаще всего это пероксидаза хрена (HRP) — активность которого обеспечивает сигнал. В новом методе на этом этапе ученые заменили конъюгат HRP-антитело на рекомбинантный растворимый биотинилированный ACE2. Последующее инкубирование с комплексом стрептавидин-HRP используется для обнаружения ACE2, связавшегося с антигеном — иммобилизованным RBD. В результате они получили конкурентный анализ, в котором наличие в образцах антител, блокирующих связывание растворимого ACE2 с иммобилизованным RBD, приводит к дозозависимому снижению сигнала.

Описанная конфигурация оказалась более чувствительной, чем обратная, где в качестве антигена используется иммобилизованный ACE2, а для конкурентного анализа — биотинилированный RBD. Кроме того, если в роли антигена выступает иммобилизованный RBD, для прямого и конкурентного ИФА работает один и тот же протокол. Общее время анализа составляет 3,5–4 часа.

Используя как конкурентный, так и прямой ИФА ученые проанализировали 58 образцов сыворотки крови от доноров, переболевших COVID-19 или контактировавших с больными. Конкурентный ИФА показал, что образцы с высоким уровнем IgG к RBD, как правило, наиболее эффективно блокируют взаимодействие RBD-ACE2. И наоборот, образцы, в которых отсутствовали RBD-связывающие антитела, не были способны блокировать это взаимодействие.

Ученые считают, что новый конкурентный анализ может быть хорошим дополнением к более сложным тестам для обнаружения нейтрализующих моноклональных антител. Метод легко адаптируется к существующим платформам и может представлять особую ценность при отборе доноров реконвалесцентной плазмы и мониторинга иммунного ответа на вакцинацию. Анализ также может быть полезен для сероэпидемиологических исследований.

Источник

Kento T. Abe, et al. // A simple protein-based SARS-CoV-2 surrogate neutralization assay. // bioRxiv preprint 2020.07.11; DOI: 10.1101/2020.07.10.197913
Добавить в избранное

Вам будет интересно